通过流式细胞术绝对计数——最大化immunophenotypic数据解释的准确性

在这科技的关注,我们将绝对计数的原理和优势服务提供使用时结合肿瘤immunophenotypic分析。

绝对计数是一个应用程序,允许科学家流式细胞术量化在组织和细胞的总数可以用作测量肿瘤的免疫细胞的浸润。在这科技的关注,我们将绝对计数的原理和优势服务提供使用时结合肿瘤immunophenotypic分析。

能够精确测量动态改变肿瘤微环境中的免疫反应(时差)在测试新免疫调节疗法是至关重要的。而强劲的配置immunophenotyping面板必须精确地描绘子集,这些端点的方法报道会影响数据的最终解释。一个常见的读数是”CD45的%⁺细胞,”措施的相对分布每个子集作为免疫细胞总数的百分之一。^1、2这种方法是有价值的,因为它有助于量化治疗的效果对子集的比例与不同的职业和抗肿瘤的活动。例如,CD8的比例增加⁺T细胞调节性T细胞相应的减少表明治疗减少了调节性T细胞介导抑制免疫反应的时间。

分布测量的使用作为一个唯一的读出然而,有一定的局限性。这是下面的例子中演示。在这项研究中,CT26肿瘤小鼠anti-mCTLA-4检查点抑制剂处理,导致显著的肿瘤生长抑制(图1)。检查的作用机制,我们首先用流式细胞术分析tumor-derived CD3的分布⁺和CD11b⁺细胞(T细胞和骨髓细胞,分别)总CD45之一⁺细胞(参见图2)。翻译可能从这些数据得出CTLA-4封锁引起T细胞数量的增加和髓细胞的同时降低。这将表明,机械活动的治疗是由抗肿瘤CD8的数量的扩张⁺T细胞以及抗免疫髓细胞的收缩。下面您将看到,这个结论是不正确的。

图1:CT26细胞植入皮下注射到正确的Balb / c小鼠腋窝。剂量(n = 10 /组动物发起建立了肿瘤时,和肿瘤进展监控了卡尺测量。每周抗体疫苗接种两次采样前14天。

串联计算绝对计数通常用于克服上述限制。这个端点准确测量肿瘤的浸润免疫子集,通常是单位质量报告为细胞总数。^3、4、5当绝对计数添加到上面的研究中,它变得明显,事实上骨髓细胞总数/克anti-mCTLA-4治疗后肿瘤并没有改变(图2)。相反,观察到髓细胞的比例下降更有可能造成的证明绝对的T细胞数量的增加。外卖的消息是,当目标子集的分布的变化是引发的疗法,它不一定是由于细胞子集的绝对数量的变化而可能发生的后果的扩张或收缩,不同的子集。

图2:分布与T细胞和髓细胞绝对计数测量CT26肿瘤。执行统计分析使用一个学生的学习任务(* p < 0.05)。

下游immunophenotypic分析肿瘤相关巨噬细胞(tam)和T细胞亚群进一步强调的价值包括绝对计数端点。如图3所示,尽管分析显示,肿瘤M2 tam的比例减少,绝对数量保持不变。因此,在初步分析相比,绝对数量并不表明M2 TAM药效学有助于整体功效在这项研究。这是一个更可靠的结论基于可用的数据。最后,anti-mCTLA-4治疗引发CD8的绝对数量的增加⁺T细胞和CD4⁺辅助T细胞。综上所述,这些数据证明绝对计数可以基本准确量化的总细胞数tissue-derived子集。

图3:分布与M1和M2的绝对计数测量tam, CD8 + T细胞和CD4 +辅助CT26细胞肿瘤。执行统计分析使用一个学生的学习任务(* p < 0.05)。

绝对计数方法

下游immunophenotypic分析肿瘤相关巨噬细胞(tam)和T细胞亚群进一步强调的价值包括绝对计数端点。如图3所示,尽管分析显示,肿瘤M2 tam的比例减少,绝对数量保持不变。因此,在初步分析相比,绝对数量并不表明M2 TAM药效学有助于整体功效在这项研究。这是一个更可靠的结论基于可用的数据。最后,anti-mCTLA-4治疗引发CD8的绝对数量的增加⁺T细胞和CD4⁺辅助T细胞。综上所述,这些数据证明绝对计数可以基本准确量化的总细胞数tissue-derived子集。

图4:控制策略来测量样品的体积吸气,总量的绝对计数活细胞,和生活CD45 +细胞,使用绝对计数流面板。

图4说明了绝对细胞数是如何计算的。珠地区量化珠子的数量通过流式细胞分析仪,使吸气的样品体积的测量。单元门使用染料可行性分析,包括死去的细胞。死细胞排斥后,CD45表达式是测量计算细胞的百分比下降CD45生活⁺电池门。CD45的总数⁺免疫细胞血细胞计数器检测到的然后用以下公式计算。最后,由于肿瘤开始,细胞计数/克可以back-calculated肿瘤。

上述研究的完整数据集提供请求。它描述了检查点封锁影响下面的子集的计数和概要CT26肿瘤;以及,面板,用于制造这些测量。

• 粒细胞myeloid-derived抑制细胞

• 单核细胞的myeloid-derived抑制细胞

• 树突细胞

• 肿瘤相关巨噬细胞(M1和M2)

• B细胞

• 自然杀伤细胞

• 自然杀伤T细胞

• CD8 + T细胞

• CD4 +辅助T细胞

• 调节性T细胞

接触的科学家Labcorp请求完整的数据集或了解更多关于我们的绝对计数服务以及如何应用于临床前研究。金博宝188网址

引用

²刘易斯,凯瑟琳·E。,et al. “Interleukin-21 combined with PD-1 or CTLA-4 blockade enhances antitumor immunity in mouse tumor models.” Oncoimmunology 7.1 (2018): e1377873.

³Muroyama,徐怀钰,et al。”立体定向放射治疗增加功能抑制的调节性T细胞在肿瘤微环境。“癌症免疫学研究5.11 (2017):992。

⁴轻木,艾瑞卡,et al。”治疗量T细胞反应诱导肿瘤的肿瘤坏死因子和美法仑依赖自然杀伤细胞和树突细胞的早期触发。“欧洲免疫学杂志》47.4 (2017):743 - 753。