确定临床前汽车t细胞通过金博宝188网址流式细胞术持久性

在临床前研发、金博宝188网址汽车(嵌合抗原受体)t细胞疗法通常是调查使用鼠标作为实验对象。在这种背景下,免疫力低下小鼠携带人类起源的肿瘤负荷和汽车给人类与同种异体T细胞。过继转移细胞由工程嵌合抗原受体与肿瘤细胞的表面抗原(例如CD19)。

由于工程T细胞绑定到肿瘤细胞,T细胞的激活并杀死肿瘤细胞MHC无限制的庄园。老鼠在临床前研究金博宝188网址遵循的预定义的参数,评估肿瘤的生长和负担来确定汽车的功效T细胞(了解更多关于如何确定疗效的生物发光成像(BLI)。

关键成功因素的T细胞抗肿瘤反应是汽车多长时间后T细胞存在注入到宿主(持久性)。尽管完整的功能,它已经表明,持久性差车T细胞可以限制一个有效的抗肿瘤反应。¹在临床长期缓解血液恶性肿瘤患者T细胞与持续的持久性的汽车。²Co-stimulatory信号被认为影响T细胞扩张和持久性。金博宝188网址临床前研究调查汽车构造改造的功效包括4-1BB co-stimulator域已经与长车T细胞持久性、较慢的和持续的效应函数,一个更高比例的记忆T细胞。³评估汽车T坚持临床前研究确定影响临床成功。金博宝188网址

这种技术焦点将为读者提供信息测量汽车T细胞的持久性,用流式细胞术在临床前阶段。金博宝188网址

小鼠模型为汽车T细胞评估候选人

2017年9月,美国食品和药物管理局批准了第一辆车T细胞疗法。细胞疗法是由诺华和叫做Kymriah销售。Kymriah也被称为tisagenlecleucel并被批准用于儿童和年轻人不再对标准治疗B细胞急性淋巴细胞白血病。Kymriah基于卡尔6月的工作,博士学位。在NSG宾夕法尼亚大学^TM老鼠。

NOD.Cg -Prkdc^scidIl2rg^tm1Wjl/ SzJ鼠标,众所周知的品牌名称,点头scidγ(NSG™),不表达Prkdc基因和x连锁Il2rg基因。的scid(严重联合免疫缺陷)突变的DNA修复复杂蛋白质Prkdc和呈现的小鼠B和T细胞缺陷。这些老鼠没有补充和自然杀伤(NK)细胞和缺乏细胞因子信号通路。这些缺陷使得老鼠理想和高度服从人类免疫细胞的移植,包括汽车T细胞。老鼠灌输各种各样的人类肿瘤和临床前的黄金标准汽车T细胞研究。金博宝188网址

在我们的金博宝188网址临床肿瘤科,我们可以使用任何商用鼠标应变汽车T细胞疗法和其他细胞过继转移研究,包括核供应国集团^TM老鼠,在一定条件下,我们可以接受专业的老鼠。

的PersistenceT^TM从临床肿瘤学面板用于生金博宝188网址成纵向车T细胞持久性数据可以使用5 uL的全血。它是格式化的溶解/不洗与绝对计数分析。面板的灵活性,提供机会添加特定的FITC anti-CAR探针,PE和APC渠道。NSG杰克逊实验室的老鼠(美国缅因州巴尔港)管理2 x10⁷人类PBMCs、全血是7 - 14 - 21天邮报PersistenceT管理和接受^TM小组评价。

表1描述了PersistenceT中所使用的试剂^TM面板。控制策略是详细如图1所示。

表1:PersistenceT^TM面板的抗体和其使用的描述。

图1:人类T细胞使用PersistenceTTM面板的分析。控制策略始于双重排斥(A)和移动与珠珠结合荧光计数门(B)。下一个碎片是排除(C)和鼠标细胞区别于人类细胞使用anti-mouse CD45和反CD45分离人类T细胞(D)。通过反CD3分子控制(E)的数量,最后人类CD8 +及CD4 + T细胞(F)决定的。

纵向Immunophenotypic表征汽车使用PersistenceT T细胞^TM面板

在临床肿瘤学设置、汽车T细胞扩张和持久性与反应,达到缓解的病人。⁴由于这种观测,建立可靠的方法跟踪汽车T细胞数量尤为重要,不仅在汽车T细胞疗法的有效性的评估,但从临床前安全性评价的设置。金博宝188网址严重的副作用临床汽车T细胞疗法指出,最严重的是细胞因子释放综合征(CRS)和与汽车有关T细胞扩张在活的有机体内。⁵

的PersistenceT^TM面板直接适用于人类汽车的评价样本取自小鼠T细胞数量。由于低全血需求,样本可以从相同的几次鼠标或通过使用群老鼠来完成学习目标。NSG老鼠可能放置在长期研究关注汽车T持久性的评估。PersistenceT如何的一个例子^TM面板可以用来衡量人类T细胞在NSG老鼠如图2所示。

改善汽车T细胞的持久性

车体内T细胞的持久性是汽车的长期临床疗效的替代标记T细胞疗法。研究表明,某些汽车T细胞,含有CD28 costimulatory域展览T细胞exhaustion-related基因的表达增加,而4-1BB (TNFSF9) costimulatory域相同的抗原特异性降低精疲力竭的表型。这可能有助于解释为什么在临床试验的患者复发或难治性急性淋巴细胞白血病,汽车T细胞表达CD28域已报告持续了3个月,而汽车T细胞4-1BB域持续5年,超过6个月在几乎所有的情况下,可以对其进行评估。⁶

T细胞通过一代又一代

汽车T细胞继续发展通过修改嵌合抗原受体。每辆车T细胞有scFv(单链片段变量)。变量的scFv结合地区的重链(VH)和可变区域的轻链(重要的)领域。scFv是融合蛋白的VH和重要的免疫球蛋白,与短链接器10至25个氨基酸的肽。

第一代汽车有一个细胞外绑定域名,枢纽区、跨膜域和一个或多个细胞内信号域。所有汽车T细胞CD3ζ链域为胞内信号和T细胞激活的主要发射机的信号。添加co-stimulatory域(CD28或4-1BB)定义的第二代汽车。目的是提高T细胞增殖,细胞因子分泌和体内持久性。

金博宝188网址临床数据表明,第三代汽车改善效应函数和更长的体内持久性与第二代汽车。第三代汽车有多个co-stimulatory域(CD28-41BB或CD28-OX40)。装甲汽车和卡车(车T细胞redirected为universalcytokinek维生)名字有时用于第四代汽车T细胞。第四代汽车T细胞可以包括增强T细胞扩张的因素,抗肿瘤活性和持久性。⁷

不管汽车或卡车一代,PersistenceT^TM面板提供了一个极好的工具,短期或长期监测车体内T细胞持久性的临床设置。金博宝188网址

总结

测量汽车与PersistenceTTM T持久性是由简单的面板。我们的流式细胞仪面板允许测定纵向车体积小的血液T持久性。人类CompTTM面板(表2)是一个很好的例子,其他合格的面板可以被添加到一个临床前汽车T研究生成全面的流式细胞仪的数据集。金博宝188网址

表2。个人标记在人类总数^TM白细胞面板。

想要了解更多关于如何PersistenceT^TM面板,或我们的一个其他流式细胞仪面板,可以纳入你的临床肿瘤学研究,以了解更多关于我们的广泛的流式细胞仪项目联系的科学家。金博宝188网址

引用

¹歌DG,你们问,Carpenito C,普桑,王LP,霁C, Figini M, 6月CH, Coukos G,鲍威尔DJ Jr .)体内持久性、肿瘤定位,CAR-engineered T细胞的抗肿瘤活性增强costimulatory信号通过CD137 (4-1BB)。

癌症研究》2011年7月1;71(13):4617 - 27所示。

²莫德SL,弗雷N,肖PA, Aplenc R,巴雷特DM, Bunin新泽西,et al。嵌合抗原受体T细胞白血病的持续缓解。郑传经地中海J。2014; 371(16): 1507 - 17所示。

³长啊,Haso WM,舍恩摩根富林明,Wanhainen公里,Murgai M,尹浩然,Ingaramo。4-1BB聚集有关改善主音信号引起的T细胞衰竭嵌合抗原受体。Nat医学。2015;21:581 - 90。

⁴波特DL,黄WT、弗雷NV雷斯科幻,肖PA,罗兰啊,et al .嵌合抗原受体T细胞持续诱导持续缓解复发难治性慢性淋巴细胞白血病。Sci Transl医学。2015;ra139 7 (303): 303。

⁵Santomasso B, C的事情,威斯汀J, K Rezvani, Shpall EJ。汽车另一边的t细胞疗法:细胞因子释放综合征,神经毒性和财政负担。

是Soc肿瘤防治杂志建造书。2019年1月;39:433 - 444。

⁶地磁MV和6月CH。使收养更好的嵌合抗原受体t细胞疗法。癌症研究杂志2016年4月15日;22日(8):1875 - 1884。

⁷Chmielewski M, Abken h。卡车:汽车的第四代。专家当今医学杂志。2015;15 (8):1145 - 54。