建模immuno-oncology人性化的老鼠

免疫缺陷小鼠的设计缺乏适应性免疫,使他们的理想宿主支持人类肿瘤细胞的移植和增长。金博宝188网址临床异种移植模型利用免疫缺陷小鼠免疫疗法是有限的的调查由于缺乏功能的免疫细胞。这个焦点将强调一个人类t淋巴球细胞的方法可以在免疫受损的老鼠传播和支持异种移植肿瘤的生长。

NOD-scid IL2Rγnull (NSG)小鼠的道与人类外周血单核细胞在异种移植模型(hPBMCs)利用成功评价疗效和药效学对人类T-Lymphocytes1针对抗原表位的免疫抑制剂检查站。该模型在传统的异种移植是独特的,因为人类t细胞功能可以针对人类肿瘤抗原表位在鼠标直接可翻译的临床意义。NSG小鼠腹腔巨噬细胞缺乏树突和人口和携带两个特定突变呈现高度不足的淋巴细胞;禁用Pkrdc突变方面的DNA修复,使鼠标B和t细胞缺陷,和删除NK细胞maturation2 IL2Rγ块。这种缺陷的组合允许移植hPBMCs并允许人类t淋巴球的扩张的NSG鼠标。

hPBMC栽种的道NSG鼠标有警告之前,必须评估人类捐赠者和肿瘤模型选择。首先,政府人类免疫细胞的老鼠导致t细胞介导的毒性与移植物抗宿主病(GvHD)一致,人类淋巴细胞攻击小鼠的组织,限制治疗window3。第二,嫁接效率,细胞类型,和活动曾被观察到人类捐赠sources4之间变量。最后,我们观察到的实例hPBMC人类肿瘤异种移植的排斥(数据没有显示)。评估这些参数与供体来源和肿瘤模型的选择,启动之前明确的功效研究,对平移早期发展项目的成功至关重要。

实验设计

本研究的目的是评估人类从hPBMCs管理t淋巴球NSG的移植人类肿瘤异种移植小鼠轴承皮下。动物保健和使用符合执行指南AAALAC-accredited的护理和使用实验动物设施。NSG老鼠(美国缅因州巴尔港杰克逊实验室、应变# 0005557)轴承皮下MiaPaCa-2人类胰腺导管腺癌是静脉注射hPBMCs从四个不同的正常健康的捐赠者(美国洛杉矶CA Hemacare)。肿瘤的生长,体重和GvHD-like特征进行评价。全血收集人类淋巴细胞标记流式细胞术分析确认捐赠CD45 +细胞移植,包括CD4 +和CD8 +细胞,14天,28日,42篇hPBMC管理局(图1)。

图1 -实验设计评估hPBMC移植MiaPaca-2肿瘤中轴承NSG老鼠。

肿瘤的生长、体重和疾病进展

MiaPaCa-2肿瘤倍增时间(Td)的治疗控制动物是9.1天,Td的动物管理hPBMCs范围从8.7到11.6天在每个捐赠者组。观察变化增长在个人管理hPBMCs植入后超过30天。肿瘤生长在1000毫米³并不影响移植的hPBMCs(图2)。这些结果表明任何捐助者利用将适合MiaPaCa2功效研究时间评估尺寸(te)的1000毫米吗³。

图2 - MiaPaCa2皮下肿瘤的肿瘤生长(n = 10)后hPBMC管理。

出现GvHD症状是由体重监测和临床观察;虽然没有在这项研究中,病理确诊症状观察到在这个模型与disease5强烈相关。症状包括体重损失(图3)大于10%的基线,粗糙的毛发,弯腰驼背的姿势,皮肤损伤,和腹泻——动物展示所有症状,或几个严重程度高,被研究。32天hPBMC注入后,临床症状观察每一组的一半或更多的动物。动物不移除GvHD症状被由于肿瘤负荷超过2000毫米³,或者在研究终止。

图3 - hPBMCs后体重变化的评估管理

人类淋巴细胞的移植和持久性

移植测量14、28和42天之后hPBMC政府通过immunophenotypic分析人类从NSG小鼠外周血中免疫细胞标记:mCD45(小鼠pan-leukocyte) hCD45(人类pan-leukocyte) hCD3 (pan-T-Cell) hCD4(辅助和t - reg),和hCD8(细胞毒性淋巴细胞)被流式细胞术检测(图4)。

出现GvHD症状是由体重监测和临床观察;虽然没有在这项研究中,病理确诊症状观察到在这个模型与disease5强烈相关。症状包括体重损失(图3)大于10%的基线,粗糙的毛发,弯腰驼背的姿势,皮肤损伤,和腹泻——动物展示所有症状,或几个严重程度高,被研究。32天hPBMC注入后,临床症状观察每一组的一半或更多的动物。动物不移除GvHD症状被由于肿瘤负荷超过2000毫米³,或者在研究终止。

图4 -控制策略的检测人类免疫细胞与hPBMCs NSG老鼠重组。

hCD45 +百分比计算的hCD45 +细胞百分比总活细胞(基于细胞绝对计数/µL全血)和使用程度的一项指标hPBMC移植。我们发现全血hCD45 +细胞百分比随时间被发现在所有捐助者(图5)。然而,捐助者2和4 hCD45细胞表现出更强的增加相比,基于个体捐赠者1和3的移植不高42篇hPBMC管理。动物在所有团体达到% hCD45移植水平28天邮报hPBMC政府发表的文献是一致的模型⁶。

hPBMCs NSG老鼠导致管理持久性的人类t细胞与最小的鼠标对MiaPaCa-2肿瘤生长的影响。这个模型代表了一个强大的基础平台研究小说的影响利用人类t淋巴球的代金博宝188网址理直接抗肿瘤活性有直接的临床意义。未来的工作将演示FDA批准的效果对人类肿瘤异种移植免疫治疗与hPBMCs NSG老鼠重组。

图5 - hCD45 +细胞移植的程度在全血中发现从NSG老鼠hPBMCs管理

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