Phospho-protein检测在实体肿瘤中使用phospho-flow血细胞计数

在本文中,我们将展示phospho-protein检测在实体肿瘤中使用phospho-flow血细胞计数和检查分析cabozantinib-induced抑制PI3K / AKT JAK-STAT信号在肿瘤与宿主免疫细胞。

的在活的有机体内小分子抑制剂的效果往往是评估通过测量细胞内信号蛋白的磷酸化状态通路的药物靶点。这可能是一个挑战,当分析实体肿瘤是必需的。在临床前研究中,利用动物模型中,肿瘤最常见的方法分析免疫印迹和ELISA-based技术。然而,这些大部分分析方法有两个主要缺点。他们的相对能力同时测量多个目标是次优的。更重要的是,他们无法分析目标在多个异构的肿瘤样本中不同的子集。这一点非常重要,当目标信号蛋白有反对功能在不同的细胞类型等肿瘤微环境中免疫细胞与肿瘤细胞,甚至是关键,如果药物效应发生在一个而不是两个子集。

Labcorp已经开发了一个新的phospho-flow-based平台同时分析多个细胞信号目标宿主免疫细胞和肿瘤细胞车厢来自实体肿瘤。这是通过区分肿瘤细胞浸润的宿主免疫细胞由immunophenotyping pan-hematopoietic细胞标记CD45 phospho-protein之前分析。演示这个平台的效用,水平的磷酸化STAT5和AKT的下游目标(S6)测量从小鼠皮下肿瘤MV-4-11收获cabozantinib FLT3抑制剂。图1显示,cabozantinib减少了人类的魔法石第六章和pSTAT5水平(h) CD45 +肿瘤细胞。没有水平的变化这些phospho-proteins观察在鼠标(m) CD45 +宿主免疫细胞(没有显示)。因此,洞察PI3K / AKT信号传导活动JAK-STAT获得,这是有据可查的通路调节宿主免疫和肿瘤的生长,给治疗和有吸引力的目标。

图1:固体肿瘤Phospho-Flow STAT5以及MAPK信号的分析。

MV-4-11是急性髓系白血病(AML)的模型,一个恶性肿瘤由于基因突变的基因之一。FLT3基因最常见的事件发生时,结果在一个既定的活跃FLT3蛋白质,使癌细胞扩散通过触发hyper-activation JAK-STAT和PI3K / AKT信号。¹Cabozantinib-mediated FLT3已经证明逮捕MV-4-11抑制肿瘤的生长在活的有机体内,这与一种蛋白激酶的抑制和STAT信号在体外。²尽管活跃JAK-STAT5和PI3K / AKT信号开车已有详细记载在许多模型肿瘤生长,这些信号蛋白的活动也需要T细胞激活和记忆T细胞形成的一代。^3、4、5这种二分法强调的重要性,能够同时分析phospho-proteins固体tumor-derived免疫和肿瘤细胞。

肿瘤phospho-flow Labcorp有潜力推动细胞信号。固体组织phospho-flow被描述在2010年肺癌和腹膜肿瘤。⁶以后,其他稀缺的成功方法的报告。最近,一种方法称为解剖与血细胞计数和成功地用来测量phospho-proteins上皮细胞样本,以及后来的结直肠肿瘤^7,8应该注意的是,这些方法需要固定组织收割后,可以改变受荧光抗体的抗原表位用于immunophenotyping和信号分析。这可以限制技术提供的数据量。实体瘤phospho-flow Labcorp不需要固定,immuno-staining之前。这有助于我们针对不同的人群进行分析的能力。我们正在扩大我们的能力。正在进行的工作的重点是开发新的实体瘤phospho-flow服务将使体内治疗诱导效应的分析在特定的T细胞和肿瘤细胞同时子集。

联系我们了解更多关于固体肿瘤phospho-flow,以及信息扩大信号蛋白的列表,我们可以提供分析。

引用

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³瓦拉,j . A。f;Casado大肠;德卡斯特罗,j .;Cejas p;Belda-Iniesta c;& Gonzalez-Baron m (2004)。PI3K / Akt信号通路和癌症。癌症治疗的评论,30.(2),193 - 204。

⁴王妃,a &墨菲,j。j (2016)。在癌症和imCantrell STAT5, d .(2002年2月)。

⁵蛋白激酶B(一种蛋白激酶)监管和T淋巴细胞的功能。在研讨会在免疫学1号(卷。14日,页。19-26)。学术出版社。

⁶林,c . c;黄,w . l .;苏,w . p .;陈,h·h·;赖,w·w·;燕,j。j;&苏w . c (2010)。单细胞磷地理流式细胞仪可以检测磷量的动态变化Stat1在肺癌细胞水平。血细胞计数部分,77年(11),1008 - 1019。

⁷西蒙斯,a·j·;巴纳吉,a;麦金利e t;Scurrah, c . r .;鲱鱼、c a;Gewin l s;…&爱尔兰j . m . (2015)。血细胞计数检测基于单还是完整的上皮细胞分析显示MAPK信号激活从肿瘤坏死因子α应承担的发散体内诱导细胞凋亡。分子系统生物学,11(10),835年。