使用新的CompDC™面板，通过流式细胞术进行全面的树突状细胞分析

为了满足日益增长的对小鼠临床前模型中强大的全面DC免疫表型的需求，我们配置了一个新的标准面板，CompDC™。在本次技术聚焦中，我们将演示如何使用该面板分析肿瘤和其他组织来源的细胞样本中的各种DC子集。

T细胞介导的抗肿瘤反应取决于抗原呈递细胞(APC)的活性，它呈递肿瘤相关抗原(TAA)并向T细胞提供共刺激信号。这反过来又会激活肿瘤特异性T细胞，触发它们的扩张和聚集到肿瘤中发挥作用。树突状细胞(DC)是专业的apc，在这一过程中起着重要作用。树突状细胞可被激活表达大量共刺激配体，并可内化抗原并向CD4和CD4呈递免疫优势肽⁺和CD8⁺T细胞。开发利用DC功能的新疗法是一个深入研究的领域。为了促进这些努力，并满足日益增长的对小鼠临床前模型中强大的全面DC免疫表型的需求，我们配置了一个新的标准面板，CompDC™。在本次技术聚焦中，我们将演示如何使用该面板分析肿瘤和其他组织来源的细胞样本中的各种DC子集。

有关不同DC亚型及其在癌症生物学中的功能的一般介绍，请阅读我们的博客树突状细胞生物学和使用同基因免疫肿瘤模型的分析导论

CompDC™面板允许调查人员确定是否金宝搏188亚洲真人体育在活的有机体内治疗影响肿瘤、肿瘤引流淋巴结(LN)或其他宿主隔室中不同DC亚群的丰度和激活状态。它是一个12色的面板，结合了一组抗体，当适当的检查，描绘了不同的DC子集，并提供了对DC的T细胞激活潜力的洞察(表1)。通过细致的门控策略，面板首先通过使用排除门控排除巨噬细胞，粒细胞和B细胞，促进了DC分析的精确。这一过程最大限度地降低了由于不相关或自身荧光细胞的污染而影响直流分析的风险。然后利用CD24的表达来帮助描述传统的DC亚型，通常根据CD11c和MHC II类的中至高表达水平来分类。这些传统的dc包括CD103⁺/ CD8⁺DC1子集和CD11b⁺DC2子集(图1A)，它们已被证明驱动CD8⁺和CD4⁺T细胞抗肿瘤反应。^[1]XCR1表达已被多个小组证实为具有交叉呈现活性的dc的标记物，这是dc介导的CD8激活所需的表型⁺T细胞。^[２]图1B和1C显示了XCR1⁺B16-F10肿瘤源性细胞和引流淋巴结的DC分析。如所示，XCR1表达通常与DC1子集相关。最后，通过检测成熟标记CD80和CD86的表达来评估树突状细胞的T细胞共刺激潜力。图1D显示，在B16-F10黑色素瘤中，这些标志物在dc上的表达相对较低，说明肿瘤微环境(TME)对dc的免疫抑制作用。

表1:CompDC™面板抗体及其用途描述

图1:使用CompDC™面板分析直流子集。B16-F10黑色素瘤来自小鼠。肿瘤源性细胞中的DC1和DC2亚群分析(A)，肿瘤中CD103+ DC1细胞中的XCR1表达(B)， B16-F10荷瘤小鼠的淋巴结(C)。共刺激标志物CD80和CD86在肿瘤源性dc中的表达(D)。红色峰代表靶点染色细胞。蓝色峰代表未染色阴性对照。

CompDC™还可以定制用于另外两个DC子集的分析。这包括炎症性dc (infdc)，它通过取代抗cd206和抗ly - 6c抗体来实现。infdc已被证明具有促进抗肿瘤活性的作用，并可在单核细胞骨髓衍生抑制细胞(M-MDSC)门外作为CD11c进行圈定⁺MHCII⁺CD11b⁺CD206⁺单元(图2A)。^[3]浆细胞样dc (pDCs)也可以通过替代抗siglech抗体来量化。虽然pDC在TME中的功能还没有被完全表征，但许多报道表明，这些pDCs可能具有功能受损，甚至可能对抗肿瘤反应具有免疫抑制作用。^[4]pDCs一般CD11c表达水平较低，Siglec-H阳性，如图2B所示。

图2:通过定制CompDC™面板，可以对infDC和pDC子集进行分析。(A) B16-F10肿瘤衍生细胞中infDC的分析。(B) CT26结直肠癌肿瘤源性细胞中pDC的分析。

要了解更多关于CompDC™面板以及如何将其纳入您的研究，请联系Labcorp的科学家。

参考文献

²威利，B.，塞帕宁，E.，肖，K.，泽米克，R.，赞克，D.，普拉托，S.，…和怀斯曼，J.(2015)。移行的XCR1+ CD103−和XCR1+ CD103+树突状细胞交叉呈递皮肤黑色素瘤抗原Oncoimmunology，4(8), e1019198。

^3.库恩，S.，杨，J.，和Ronchese, F.(2015)。单核细胞来源的树突状细胞对CD8+ T细胞活化和局部免疫治疗后的抗肿瘤反应至关重要。免疫学前沿，6, 584年。