荧光素酶标记细胞系:肿瘤学研究的宝贵工具

作者:Manali Dimri，博士|科学家，科学发展
日期: 2021年7月

荧光素酶是一种在生物体内底物(d -荧光素)存在时发光的氧化酶，这一过程被称为生物发光。最常见的荧光素酶的基因来自一种叫做萤火虫荧光素酶的发光酶家族^1、2．

在临床金博宝188网址前研究中，小动物在活的有机体内成像在可视化生理过程、疾病进展和治疗发展方面发挥着重要作用。荧光素酶(luc)激活细胞系通过生物发光成像(BLI)提供了一种简单、高通量和可靠的方法来定量评估肿瘤负担和肿瘤对实验动物治疗的反应。^1、2．点击这里了解更多关于BLI的信息

与传统方法相比，BLI系统的灵敏度和准确性具有多种优势，例如:

(1)无创实时全身在活的有机体内肿瘤监测与成像

(2)连续评估同一动物的肿瘤进展和对治疗的反应

(3)转移评估

(4)减少对动物祭祀的需求

为什么是Labcorp药物开发公司(前身是Covance Laboratories)?

Covance是2003年第一个提供BLI的合同研究组织(CRO)，在过去的18年里，我们在光学成像领域积累了丰富的经验。我们提供超过80种独特的血液恶性肿瘤细胞系的大量荧光素酶激活细胞系(表1)。我们有专门的专家团队为您设计最佳的肿瘤学研究，并确保研究顺利执行。我们的科学家擅长设计我们的内部细胞系或您感兴趣的细胞系，以及定制表达荧光素酶的载体，用于BLI检测。完整的细胞系列表

LabCorp药物开发公司(前身为Covance Laboratories)拥有Dana Farber癌症研究所和其他组织的许可协议，提供了更多的特性，在活的有机体内验证表达荧光素酶的肿瘤系。

我们表达荧光素酶的肿瘤细胞系有

·荧光素酶表达稳定

·荧光蛋白(mCherry)和Luc 2基因

·信号强度与细胞数的定量相关性

·灵敏度高，信噪比低

·可获得来自人、小鼠和大鼠的多种肿瘤细胞系

·适合在体外以及在活的有机体内化验

我们还提供了一种用于luc细胞转导的替代方法，即细胞电穿孔，允许客户选择定制的载体而不是慢病毒载体。

与BLI相关的服务包括:

它是如何工作的?

通常，癌细胞被改造成表达萤火虫荧光素酶基因和嘌呤霉素耐药基因，使用慢病毒系统进行转导(图1A)。除了Luc 2基因外，该结构物还具有一个荧光蛋白编码基因(mCherry)，能够随着时间的推移检测不同组织中的肿瘤细胞。细胞在嘌呤霉素的存在下培养，以选择插入编码萤火虫荧光素酶的慢病毒载体的细胞(图1B)。荧光素酶激活细胞产生光输出(图1C(ii))，使用IVIS®体内成像系统测量生物发光(图1C(i));然后将luc激活细胞移植到小鼠体内形成肿瘤。注射d -荧光素(底物)后，荧光素酶将催化该底物，从而产生用IVIS®(PerkinElmer, Waltham, MA)检测到的发光(图1D(i))，并使用PerkinElmer 's Living Image软件在感兴趣的区域进行分析(图1D(ii))。

图1:表达荧光素酶的肿瘤细胞系的生成在活的有机体内生物荧光成像。a .用慢病毒载体转导肿瘤细胞系。B.利用选择标记选择和扩展转导的肿瘤细胞系。C. (i)用慢病毒载体转导Raji细胞，添加d -荧光素底物后证实荧光素酶表达。(ii)荧光素酶生物发光使用Perkin Elmer's Living Image软件进行量化，并绘制细胞数量与总通量(p/s=光子/秒)的比值。D. (i) BLI监测肿瘤负荷。使用IVIS®在不同时间点进行发光成像。(ii)荧光素酶生物发光使用Perkin Elmer's Living Image软件进行量化。

Histotype	细胞系	物种
大脑	D54-Luc	人类
	Gli36-DsRed-R-Luc(获救)	人类
	ln - 827 (pMMP-LucNeo)	人类
	u - 251 - luc妇幼保健雪茄烟	人类
	u - 87 MG-Luc	人类
	GL261-Luc2	鼠标
	9 l-luc	老鼠
膀胱	T24-Luc-Neo	人类
	MB49-Luc-mCh-Puro	鼠标
结肠	COLO 205-Luc #2	人类
	hct - 116卢克	人类
	HT-29-Luc	人类
	CT26。WT-luc-mCh-puro	鼠标
	MC38-NCI。TD1-luc-mCh-puro	鼠标
子宫内膜	KLE-Luc-mCh-Puro	人类
白血病(AML)	Kasumi-3-Luc-mCh-Puro	人类
	KG-1-Luc-mCh-Puro	人类
	MV-4-11-Luc-mCh-Puro	人类
	C1498-Luc-mCh-Puro	鼠标
白血病[b]	NALM6-Luc-MCh-Puro	人类
	盐土(pMMP-Luc-Neo)	人类
白血病(CML)	k - 562 luc2	人类
白血病(erythro)	冥界92.1.7-Luc-Neo	人类
	HEL-Luc-Neo	人类
白血病[t]	DND-41-Luc-mCh-Puro	人类
	MOLT-4-Luc-MCh-Puro	人类
肝	BNL 1ME a . 7r .1- lu - mch - puro	鼠标
	消息灵通的- 55.1 - c - luc妇幼保健雪茄烟	鼠标
	Hepa 1-6-Luc-mCh-Puro	鼠标
肺	会/ 2-Luc-M38	鼠标
	AB1-Luc-mCh-puro	鼠标
肺(NSCLC)	A549-Luc-C8	人类
	HCC827-Luc-mCh-Puro	人类
	NCI-H125-Luc	人类
	NCI-H1703-Luc-mCh-Puro	人类
	NCI-H1975-Luc	人类
	NCI-H460-Luc2	人类
	PC-9-Luc-mCh-puro	人类
淋巴瘤	EL4-Luc-mCh-Puro	鼠标
淋巴瘤(b细胞)	A20-Luc2-Puro	鼠标
淋巴瘤(伯基特)	Daudi-Luc-mCh-Puro	人类
	Raji-Luc	人类
	Ramos-Luc	人类
淋巴瘤[弥漫性混合]	SU-DHL-6-Luc-mCh-Puro	人类
淋巴瘤(DLBCL)	OCI-Ly19-Luc-Neo	人类
	OCI-Ly3-Luc-mCh-Puro	人类
	OCI-Ly7-Luc-Neo	人类
	SU-DHL-4-Luc-mCh-Puro	人类
	Toledo-Luc-Neo	人类
	OCI-Ly1 R10-Luc-mCh-Puro	人类
	OCI-Ly1 R7-Luc-mCh-Puro	人类
乳房/乳房	MCF7-Luc-mCh-Puro	人类
	mda - mb - 231 - luc d3h1	人类
	E0771-Luc-mCh-Puro	鼠标
	mda - mb - 231 - luc d3h2ln	人类
	EMT6-Luc-mCh-Puro	鼠标
	MX-1-Luc	人类
	4 t1-luc2-1a4	鼠标
黑素瘤	OCM-1-Luc-mCh-Puro	人类
	SK-MEL-28-Luc-mCh-Puro	人类
	B16-F10-Luc-G5	鼠标
	B16-F10-Luc2	鼠标
	Cloudman S91-Luc-mCh-Puro	鼠标
	YUMM1.7-Luc-mCh-Puro	鼠标
骨髓瘤	JJN-3-Luc-G418R	人类
	MM.1S (pMMP-Luc-Neo)	人类
	NCI-H929-Luc-mCh-Puro	人类
	5 tgm1-luc	鼠标
	J558-Luc-mCh-Puro	鼠标
卵巢	A2780-Luc	人类
	IGROV1-Luc-Mch-Puro	人类
	OVCAR-5-Luc-mCh-Puro	人类
	OVCAR-8-Luc-mCh-Puro	人类
	SK-OV-3-Luc-D3	人类
	ID8-Luc-mCh-Puro	鼠标
	国家卫生研究院:OVCAR-3-Luc-mCh-Puro	人类
胰腺	BxPC-3-Luc2	人类
	米娅PaCa-2-Luc	人类
	PANC-1-Luc	人类
	Pan02。TD1-Luc-mCh-Puro	鼠标
前列腺癌	杜145 - luc	人类
	PC-3-Luc	人类
	PC-3M-Luc-C6	人类
肾	293 - luc妇幼保健——雪茄烟	人类
	786 - o - luc neo(获救)	人类

表1:荧光素酶标记的细胞系

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参考文献

¹Jessamy C. Tiffen, Charles G. Bailey, Cynthia Ng, John E.J. Rasko和Jeff Holst。荧光素酶的表达和生物发光不影响肿瘤细胞在体外或体内的生长。分子癌症2010;9: 299。

²Dan M. Close，徐婷婷，Gary S. Sayler, Steven Ripp。活体生物发光成像(BLI):活体动物生物过程的非侵入性可视化和询问。传感器(巴塞尔)2011;11(1): 180 - 206。注:请注意所有动物护理和使用根据动物福利法规，在经aaalac认证的设施中进行，并获得IACUC协议审查和批准。