利用ELISpot和FluoroSpot检测肿瘤抗原特异性免疫

增强肿瘤抗原特异性反应是免疫治疗的预期结果。无论是通过急性增强抗肿瘤免疫还是形成长期免疫记忆，成功促进宿主适应性免疫反应的药物有更好的临床成功机会¹．

虽然有许多测定方法可用于测量抗原特异性，但其中许多都有局限性，因为它们需要使用模型特异性试剂、基因工程动物或细胞亚群纯化步骤。我们的临金博宝188网址床前肿瘤学通过ELISpot/FluoroSpot分析提供了一个简单且负担得起的解决方案。

ELISpot和FluoroSpot使用基于夹心elisa的技术来测量细胞产生和释放可溶性靶标的频率。商业试剂盒可用于测量靶标，包括细胞因子，趋化因子，免疫球蛋白，生长因子等。我们提供一个靶点的单色酶联免疫斑点分析(ELISpot)以及同时多达3个靶点的多色荧光分析(FluoroSpot)。图1显示了用于分析肿瘤特异性IFNγ和IL-4产生细胞的FluoroSpot程序的示意图。

图1:ELISpot/FluoroSpot程序

在这篇科技报道中，我们展示了ELISpot/FluoroSpot在临床前免疫肿瘤研究中的应用，使用Hepa1-6-luc小鼠肝细胞癌模型(图2)。为此，我们使用Fl金博宝188网址uoroSpot测量了荷瘤小鼠外周血中的肿瘤特异性免疫，并表明在活的有机体内检查点抑制与抗pd -1治疗增加循环肿瘤特异性细胞产生IFNγ的数量。此外，抗pd -1将IFNγ/IL-4细胞因子从免疫抑制反应转变为更促炎和抗肿瘤的特征。

图2 Hepa1-6-luc荷瘤小鼠抗肿瘤免疫荧光斑点分析。已建立Hepa1-6-luc肿瘤的C57BL/6小鼠给予抗pd -1或同型对照抗体。取自200 μ L外周血的白细胞与经过辐照的Hepa1-6-luc细胞一起培养。A)使用CTL ImmunoSpot®S6通用分析仪定量IFNγ和IL-4分泌细胞的频率。B)分析每只小鼠中产生ifn γ的细胞频率与肿瘤体积的关系。C).通过测量IFNγ/IL-4产生细胞的比例来评估每只小鼠的Th1/Th2平衡。

与疫苗的作用机制类似，生长中的肿瘤引起适应性免疫反应，由抗体和产生细胞因子的肿瘤特异性细胞组成¹．反应的质量可以通过检查IFNγ和IL-4来表征。IFNγ已被证实通过增强T细胞介导的细胞毒性来抑制肿瘤生长。相反，IL-4通过多种免疫抑制作用促进肿瘤生长。这种二分法通常被称为Th1/Th2平衡²．如图2所示，抗pd -1增加了肿瘤反应细胞产生IFNγ的频率体外刺激。相比之下，IL-4产生细胞的频率没有显著增加，这表明检查点抑制引发了抗肿瘤保护免疫的增强。为了支持这一点，具有最高频率的IFNγ产生细胞的小鼠拥有最小体积的肿瘤。此外，抗pd -1增加了IFNγ/IL-4产生细胞的比例，这在肿瘤最小的小鼠中最为明显。

综上所述，该数据集展示了ELISpot/FluoroSpot如何进一步揭示药物对肿瘤特异性免疫反应的影响。此外，由于elisa pot/FluoroSpot检测可在小容量血液中进行，因此可纵向应用于疗效臂。因此，在不增加第二个采样臂的情况下，有机会获得药物活性的机制见解。有关ELISpot/FluoroSpot如何应用于临床前肿瘤学和免疫肿瘤研究的更多信息，请联系Labcorp临床前肿瘤学的科学家。金博宝188网址

参考文献