多重IHC用于蛋白质表达,共表达和空间关系的模式

作者:Shayna Donoghue |体外操作副科学家-IHC
日期:2018年4月


多重免疫组织化学(IHC)是一种利用单个抗原染色的基本概念来检测多个标记物的测定法。它允许过氧化物酶,碱性磷酸酶和其他共轭原代或二级抗体的标记能力,并可以使用几种常见方法(包括间接或直接染色方案)来实现。

多重免疫组织化学(IHC)是一种利用单个抗原染色的基本概念来检测多个标记物的测定法。它允许过氧化物酶,碱性磷酸酶和其他共轭原代或二抗的标记能力,并且可以使用几种常见方法(包括间接或直接染色方案)来实现

由于同时使用多种抗体的许多优势,研究人员一直在指导他们对多重IHC的关注。它使我们可以一次收集更高数量的数据,同时节省宝贵的组织样品。可以获得一个蛋白质靶标相对于另一个蛋白靶标的以及与附近的组织结构或细胞器成比例的空间数据。它通常用于确定肿瘤中免疫肿瘤学标记的子集,告诉我们一个关于肿瘤环境中发生的事情的更深入的故事。多重IHC也已成为确定细胞中标记共表达的重要解决方案。

图1:CD3(粉红色),CD4(绿色)和CT26肿瘤中的DAPI(蓝色)染色。
图1:CD3(粉红色),CD4(绿色)和CT26肿瘤中的DAPI(蓝色)染色。

可以使用多个协议完成多重IHC,其中许多概念与单抗体染色方法相同。其中一种方法可以包括间接IHC的不同变化。根据测定设计,可以使用与荧光团结合的二级抗体的相同或不同的宿主抗体来完成间接多重IHC。辣根过氧化物酶(HRP)或碱性磷酸酶(AP)偶联的二抗也可用于检测具有不同颜色染色体的多个标记。由于多种二级抗体可以与一种初级抗体结合,因此该信号被放大,从而使低表达蛋白的可视化更加可视化。
图2:CD3(粉红色),CD4(绿色),CD45(红色)和CT26肿瘤中的DAPI(蓝色)染色。

图2:CD3(粉红色),CD4(绿色),CD45(红色)和CT26肿瘤中的DAPI(蓝色)染色。

LabCorp现在最多可提供四色多路复用,并连续努力验证新的多重选择,例如Chromogen检测。在键RXM自动稳定器上开发了优化的协议,以固定染色和Aperio Versa扫描仪,以获取数据的高分辨率图像。

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注意:请注意动物护理和使用是根据AAALAC认可的设施中的动物福利法规进行的,并获得IACUC方案审查和批准。

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