更新HPBMC用于免疫肿瘤建金博宝188网址模的临床前使用

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2月，我们介绍了Labcorp的新兴人源性小鼠平台的初始数据，利用人类外周血单核细胞（HPBMC）植入。

我们使用nod.cg-的数据prkdcScID IL2RGTM1WJL/sZJ（NSG）小鼠导致了四个HPBMC供体，这些供体在HPBMC注射后至少30天表现出了一个治疗窗口，一致的T细胞植入术以及两个人类异种移植模型的生长，Miapaca-2（胰腺）和A549（NSCLC）（NSCLCC）（NSCLC）），这很健壮HPBMC促进的NSG小鼠。

现在，我们提供了初始疗效数据，证明了使用Pembrolizumab治疗后使用MIAPACA-2或A549人异种移植的HPBMC促进的NSG小鼠（KeyTruda®，anti-HPD-1）。

实验设计

这些研究的目的是评估pembrolizumab对Miapaca-2或A549人肿瘤模型的抗肿瘤反应，因为HPBMC在NSG小鼠中植入了HPBMC。动物护理和使用是根据AAAALAC认可的设施中的指南和使用实验动物的指南进行的。

NSG小鼠（杰克逊实验室，美国缅因州巴尔港，＃0005557菌株）是静脉注射的HPBMC，来自三个不同的正常健康供体（Hemacare，Hemacare，Los Angeles，CA，USA），一旦建立了（〜105-118mm）³）。pembrolizumab的治疗开始于HPBMC注射后的第二天。对pembrolizumab的反应，确定了移植物与宿主疾病（GVHD）的特征的评估，并在两个时间点上收集全血，以确认人类淋巴细胞标记的流式细胞仪分析，以确认包括CD4+和CD8+和CD8+和CD8+和CD8+和CD8+和CD8+和CD8+和CD8+和CD8+和CD8+和CD8+细胞的供体植入T细胞。

Miapaca-2和A549控制HPBMC小鼠的肿瘤生长

在未处理的对照动物中，MIAPACA-2肿瘤倍增时间（TD）约为7天，在每个供体组中施用的HPBMC的动物中的TD为〜5至7天。

肿瘤均匀生长到平均肿瘤体积为1000-1200mm³然而，到所有三个捐助者的第36天，在第36天以后看到了一些组内和组间变异性。1000mm之前的肿瘤生长³似乎没有受到HPBMC的植入影响（图1）。

这些结果表明，这三个捐助者中的任何一个都适用于Miapaca-2效力研究，其评估大小（TES）为1000mm³。

图1. HPBMC给药后MIAPACA-2皮下肿瘤的控制生长

未经处理的对照动物中的A549 TD为11天，在每个供体组的HPBMC的动物中为9到12天。

肿瘤用供体1和3的HPBMC均匀生长，平均肿瘤体积为1000-1200mm³到第40天，超过第40天的增长有些差异。

在那些具有A549肿瘤和HPBMC的小鼠中，群体内变异性最为明显（图2）。

这些结果表明捐赠者1和3最适合A549TES的功效研究1000mm³。

图2. HPBMC给药后皮下A549肿瘤的控制生长

人类淋巴细胞的植入和持久性

在第28天和第38天（MIAPACA-2）或第42天（A549）进行HPBMC给药后，通过对研究小鼠的外周血中人类免疫细胞标记的免疫表型分析进行了评估。

流式细胞仪标记包括MCD45，HCD45，HCD3，HCD4和HCD8。在下面介绍了带有MIAPACA-2（图3A）或A549肿瘤（图3B）的动物的人类CD45+细胞，如下所示，并用作HPBMC植入的指标。

我们发现，在两个时间点，在所有供体中都检测到全血的HCD45+细胞，并且与已发表的文献一致。¹

尽管群体内变异性很明显，但在第一个时间点和第二个时间点之间，植入的平均程度保持一致或增加。看来，HPBMC植入具有A549肿瘤的动物比植入具有Miapaca-2肿瘤的动物的动物要高，这与我们的初始模型开发数据一致。

目前，尚不清楚这是由于正常的研究与研究变异性的结果，还是是否存在模型依赖性。

图3.从NSG小鼠中检测到的HPBMC和含有Miapaca-2（A）或A549（B）异种移植物的NSG小鼠的全血中检测到的HCD45+细胞的植入。

图4说明了全血中CD4+和CD8+ T细胞分布的一个示例，并说明T细胞之间的分布在时间点之间是一致的。

虽然这些数据仅代表具有Miapaca-2肿瘤的小鼠中的供体1，但在测试的供体和模型中报告了类似的数据。

具体而言，在含Miapaca-2-2的小鼠中，CD4+和CD8+ T细胞的分布分别为42-65％和32-46％，在A549含有的小鼠中分别分别为51-67％和22-44％（数据未显示）。

通过体重和临床观察来监测GVHD症状的发作；尽管在这些研究中没有在病理上得到证实，但在这些模型中观察到的症状与该疾病密切相关²与以前的数据（数据未显示）。

对pembrolizumab的反应

有趣的是，在测试条件下，任何供体的pembrolizumab治疗在HPBMC促进小鼠中没有影响任何供体的肿瘤生长（图5和6）。

在本文时，关于含有Miapaca-2肿瘤的HPBMC促进的人源性小鼠，关于体内对pembrolizumab的体内反应的文献很少。

尽管如此，我们的数据反映了有关胰腺肿瘤对免疫肿瘤剂的难治性的广泛文献。³如前所述，Pembrolizumab对A549的反应似乎是中等的，并且该反应似乎是供体依赖性的。⁴

尽管pembrolizumab对A549或Miapaca-2的反应始终缺乏反应，但这些模型对于使用抗HPD-1的理性组合策略的治疗方法证明是有用的，因为在不同捐赠者之间有很大的改善和评估各种反应的空间。

图5. HPBMC给药和治疗同型对照或Pembrolizumab（抗HPD-1）后，Miapaca-2皮下肿瘤的肿瘤生长（抗HPD-1）

图6. HPBMC给药和治疗同型对照或pembrolizumab后，A549皮下肿瘤的肿瘤生长（抗HPD-1）

对NSG小鼠的HPBMC给药会导致小鼠中人类T细胞的持续性，对MIAPACA-2或A549肿瘤生长的影响最小。这种方法代表了一个强大的临床前平台，用于检查新型人类药物的作用，该临床药金博宝188网址物借助人类T淋巴细胞直接具有直接临床意义的抗肿瘤活性。

未来的工作将证明通过流式细胞术浸润人类T细胞，通过治疗与HPBMC重构的NSG小鼠中FDA批准的针对人类肿瘤异种移植的免疫疗法对人类肿瘤异种移植的浸润。

Labcorp已经为您的研究需求提供了这些人类PBMC捐赠者的供应。请联系我们的临床前肿瘤学科金博宝188网址学家要查看如何将HPBMC促进的NSG小鼠用于下一次翻译免疫肿瘤研究。

参考

^2。西娜·纳西利亚人，马修·莱克莱尔（Mathieu Leclerc），艾伦·硫代（Allan Thiolat），卡罗琳·皮隆（Caroline Pilon），辛迪·勒·布雷特（Cindy Le Bret），Yazid Belkacemi，SébastienMaury，FrédéricCharlotte和JoséL。Cohen。简单，可重现和有效的临床分级系统，用于急性移植物抗宿主病的鼠模型。2018。前线。在免疫中。（9）：10。

^3。罗伯特·J·托菲（Robert J.胰腺癌的免疫疗法：障碍和突破。2018。AnnGastroenterol Surg。2（4）：274–281。