与多克隆抗体不同,单克隆抗体是针对抗原上单个表位的特异性抗体,而多克隆抗体是针对抗原各种表位的抗体的混合物。单克隆抗体的这种特异性使研究人员即使该表位的变化微妙,有时甚至是单个氨基酸的变化,也可以探测该表位。单克隆抗体的主要优点是因为它们是由杂交瘤或重组细胞系产生的,因此将无限的这些抗体供应具有相同的特异性和结构。
LabCorp利用两种不同的技术生成单克隆抗体:杂交瘤和B细胞克隆。对于杂交瘤技术,用抗原免疫啮齿动物,当检测到足够的免疫反应时,抗体产生的细胞与骨髓瘤细胞系融合并进行筛查。或者,在B细胞克隆中,筛选免疫动物的脾细胞,并从选定的B细胞克隆并表达重链基因。两种技术都提供了产生具有相同特性的抗体几乎无限供应的机会。
杂交瘤产生
- 啮齿动物宿主物种
- 用于融合的脾细胞和/或淋巴结
- 各种融合程序,例如聚乙烯乙二醇(PEG)或电催化
B细胞克隆
- 几乎所有寄主物种
- FACS的抗原特异性B细胞隔离
- 重链基因的克隆
- 哺乳动物载体和稳定细胞产生中的表达
抗体纯化和表征
- 放大:
- 腹水或体外方法
- 分支机构测试,同期
- 杂交瘤细胞系的细胞库/存储
- 哺乳动物载体的瞬时转染