OECD 231:内分泌干扰物筛选计划-两栖动物变态分析

作者:

Sarah Broadley，理学学士(荣誉)，理学硕士，PGCE，研究科学家，专业病理服务;Catherine Ross博士，DVM, MSc, MRCVS，病理学家，病理学科文斯实验室有限公司，哈罗盖特，英国

日期:

2021年1月

简介

“内分泌干扰物是一种改变内分泌系统功能的外源性物质或混合物，从而对完整的生物体或其后代或(亚)种群造成不利的健康影响。”WHO-ICPS, 2002年。

由于担心环境化学品可能对人类和野生动物造成不利影响，经合组织启动了一项高度优先的活动，修订和制定筛查和测试潜在内分泌干扰物的指南。试验包括强化啮齿动物28天重复剂量试验(试验指南407)和两栖动物变形试验(AMA试验指南231)。

“内分泌干扰物是一种改变内分泌系统功能的外源性物质或混合物，从而对完整的生物体或其后代或(亚)种群造成不利的健康影响。”WHO-ICPS, 2002年。

由于担心环境化学品可能对人类和野生动物造成不利影响，经合组织启动了一项高度优先的活动，修订和制定筛查和测试潜在内分泌干扰物的指南。试验包括强化啮齿动物28天重复剂量试验(试验指南407)和两栖动物变形试验(AMA试验指南231)。

规定

2018年，经合组织发布了修订后的《内分泌干扰化学品测试和评估概念框架》。概念框架由五个级别的测试组成，被设计成一个工具箱。

第1级-基于现有信息的排序和优先级。

第2级—体外实验提供机制数据。

第3级——体内实验提供了有关选定内分泌机制和影响的数据。

第4级——体内试验提供有关内分泌机制不良影响的数据。

第5级——体内分析提供了内分泌和其他机制影响的全面数据。

两栖动物变形试验与鱼类短期繁殖试验、子宫营养试验和赫什伯格试验一起落入第3级

目前，在欧盟没有法定要求使用特定的测试内分泌干扰，除非要求这样做。

然而，在美国，检测是强制性的，美国环保署已经制定了两层策略。

第1层分析-体外和体内实验的选择。两栖动物变形试验和鱼类短期繁殖试验属于这一范围的试验。

第2层化验-体内根尖实验包括哺乳动物2代毒性，两栖动物生长/繁殖，鸟类2代，鱼类2代和Mysid 2代。

两栖动物变形试验

材料与方法

两栖动物变形试验(AMA)是一种筛选试验，旨在经验地识别可能干扰下丘脑-垂体-甲状腺(HPT)轴正常功能的物质。它提供了一个经过充分研究的甲状腺依赖过程，对HPT轴内的活性物质做出反应，并且它是唯一现有的检测正在进行形态发育的动物的甲状腺活性的方法。

测试设计包括暴露第51阶段非洲爪蟾蜍光滑的蝌蚪至少要接受三种不同浓度的测试化学物质和一种水质控制21天。幼虫密度为每个测试池20只蝌蚪。

第七天测量

研究人员随机选择了五只蝌蚪进行人道的安乐死。他们被冲洗，吸干，并确定体重。确定每只蝌蚪的后肢、口鼻到气孔的长度和发育阶段。

第21天测量

剩余的蝌蚪被从测试罐中取出并人道地安乐死。他们被冲洗，吸干，并确定体重。确定每只蝌蚪的后肢、口鼻到气孔的长度和发育阶段。

蝌蚪被放置在Davidson的固定液中48至72小时，可以是完整的样本，也可以是包括下颌在内的修剪过的头部样本。

每缸5只蝌蚪进行组织病理学检查。

组织学制备

组织调整-整个头被加工成石蜡。

嵌入,头部嵌入在水平平面上(纵向(LS))或与切片位置朝向下(横向(TS))。

切片法,五步切片通过甲状腺和苏木精和伊红染色

组织病理学

诊断标准包括:甲状腺肥大/萎缩滤泡细胞肥大滤泡细胞增生

滤泡腔面积/胶体质量和滤泡细胞高度/形状

图1。甲状腺(箭头)，纵切面，x2倍镜。

图2。甲状腺(箭头)。x10放大。Bar = 50µm。

图3。甲状腺(箭头)横切面，x2倍镜。

图4。甲状腺(箭头)，横切面，x10倍放大。Bar = 100µm。

结果

对甲状腺组织学的影响已在没有发育影响的情况下得到证实。如果在甲状腺中看到组织病理学变化，则认为是活跃的。如果没有发现发育迟缓和组织病理学变化，则认为该化学物质是甲状腺不活跃的。这是因为甲状腺受到促甲状腺激素(TSH)的影响，任何足以改变循环甲状腺激素从而改变促甲状腺激素分泌的化学物质都会导致甲状腺的组织病理学改变。

参考文献

OECD(2018)，《评估内分泌干扰化学品标准化测试指南修订版指导文件150》，OECD测试和评估系列，OECD出版社，巴黎。https://doi.org/10.1787/9789264304741-en

OECD(2009)，试验第231号:两栖动物变形测定，OECD化学品测试指南，第2节，OECD出版社，巴黎，https://doi.org/10.1787/9789264076242-en。